黑果枸杞花色苷纳米颗粒的制备及其对氧化低密度脂蛋白诱导的人脐静脉融合细胞氧化损伤的保护作用

现代研究表明，黑果枸杞果实富含鲜见的酰化矮牵牛素花色苷，该类花色苷具有显著的抗氧化等生物活性，可清除各种自由基，有效地保护血管内皮细胞、PC12神经细胞的氧化损伤。 同其他花色苷一样，黑果枸杞花色苷稳定性易受到外界环境如氧化剂、亲核试剂、酶、金属离子、温度以及光照等外界环境影响，因而限制了其在食品工业中的广泛应用。

宁夏医科大学实验动物中心的冉林武、宁夏农林科学院枸杞工程技术研究所的闫亚美*和罗格斯新泽西州立大学食品科学系的黄庆荣*等人在上述研究的理论和技术基础上，通过CS与CPP复合凝胶体系制备CS-CPP黑果枸杞花色苷纳米颗粒，并优化其制备工艺，旨在通过微胶囊技术提高黑果枸杞花色苷的稳定性。同时，研究了CS-CPP黑果枸杞花色苷纳米颗粒对体外氧化低密度脂蛋白（ox-LDL）诱导的人脐静脉内皮EAhy926细胞氧化损伤的保护作用，为黑果枸杞花色苷的生物利用提供理论和技术依据。

1、CS质量浓度对CS-CPP黑果枸杞花色苷纳米颗粒粒径及分布的影响

CS质量浓度对CS-CPP黑果枸杞花色苷纳米颗粒粒径及分布影响较大。当CS质量浓度为0.10 mg/mL时，形成的颗粒粒径为290 nm，聚合分散系数为0.32；当CS质量浓度增加到0.20～0.30 mg/mL时，颗粒粒径下降到215～239 nm，聚合分散系数也下降到0.10～0.14，说明此时的CS-CPP黑果枸杞花色苷纳米颗粒体系比较稳定；当CS质量浓度升高到0.40～0.50 mg/mL时，CS-CPP黑果枸杞花色苷纳米颗粒粒径呈增大趋势，聚合分散系数也升高到0.26～0.37，说明该体系不稳定。

2、CS质量浓度对CS-CPP黑果枸杞花色苷纳米颗粒表面电势的影响

随着CS质量浓度的升高，形成的纳米颗粒表面电势开始增加，当CS质量浓度在0.20～0.30 mg/mL 时，表面电势从36 mV升至38 mV。纳米颗粒表面电势与分子的稳定性有关，溶液中纳米微胶囊的表面电势绝对值越大，其凝胶状态相对越稳定，即溶解或分散可以抵抗聚集。相反，表面电势绝对值越小，纳米微胶囊越倾向于凝结或凝聚，即吸引力超过了排斥力，分散稳定性被破坏，易发生凝结或凝聚。

3、CS质量浓度对CS-CPP黑果枸杞花色苷纳米颗粒包封率和载药量的影响

当CS质量浓度从0.10 mg/mL增加到0.25 mg/mL时，CS-CPP对黑果枸杞花色苷的包封率也不断增加；CS质量浓度为0.25 mg/mL时包封率达到最高（70.2%）；当CS质量浓度增加到0.30～0.50 mg/mL时，包封率快速下降。

4、花色苷纳米颗粒体外释放分析

当将制备的CS-CPP黑果枸杞花色苷纳米颗粒在pH 7.0 PBS中37 ℃孵育时，随着孵育时间的延长，花色苷的释放率增加。在2 h时其释放率为24.3%；4～8 h时释放率在54.4%～64.2%之间，且增加速率减慢。

5、CS-CPP黑果枸杞花色苷纳米颗粒表面形态

形成的纳米颗粒呈不规则球形，直径为215.3 nm，表面电势为36 mV，颗粒粒径聚合分散系数为0.10。CS-CPP自组装形成纳米颗粒主要是由于CPP上带负电荷的磷酸基团与CS上带正电荷的—NH3＋基团之间的静电相互作用。

6、CS-CPP黑果枸杞花色苷纳米颗粒对EAhy926细胞增殖的影响

当CS-CPP纳米颗粒中黑果枸杞花色苷质量浓度为100 μg/L时，能显著促进EAhy926细胞增殖；但当黑果枸杞花色苷质量浓度为400 μg/L时，能够显著降低EAhy926细胞存活率。

7、CS-CPP黑果枸杞花色苷纳米颗粒对ox-LDL诱导的EAhy926细胞氧化损伤的影响

ox-LDL诱导的氧化损伤EAhy926细胞存活率随黑果枸杞花色苷质量浓度增大而升高，黑果枸杞花色苷质量浓度为100～200 μg/L时，EAhy926细胞存活率显著升高。花色苷结构中有多个酚羟基，具有抗氧化、清除自由基、抑制细胞氧化损伤的作用。

结 论

利用CS与CPP复合凝胶体系制备CS-CPP黑果枸杞花色苷纳米颗粒最佳条件为：pH 4条件下，2 mg/mL黑果枸杞花色苷溶液与质量分数0.5% CPP溶液等体积混合，室温搅拌，然后添加等体积0.20～0.30 mg/mL CS溶液。所得CS-CPP黑果枸杞花色苷纳米颗粒粒径为215.3 nm，表面电势为36 mV，包封率为65.0%～72.2%。体外释放实验结果表明，CS-CPP黑果枸杞花色苷纳米颗粒在pH 7.0时释放率为24.3%～64.2%。体外细胞实验结果表明，CS-CPP黑果枸杞花色苷纳米颗粒在花色苷质量浓度为100～200 μg/L时能够显著提高ox-LDL诱导的氧化损伤EAhy926细胞存活率。

本文《黑果枸杞花色苷纳米颗粒的制备及其对氧化低密度脂蛋白诱导的人脐静脉融合细胞氧化损伤的保护作用》来源于《食品科学》2019年40卷17期162-168页，作者：冉林武，米佳，禄璐，陈菲，罗青，李晓莺，闫亚美，曹有龙，黄庆荣。DOI:10.7506/spkx1002-6630-20180710-134。