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(+)-儿茶素与表没食子儿茶素没食子酸酯对乙醇诱导HepG2细胞脂代谢紊乱及氧化应激的影响

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随着经济的发展,我国酒精饮料消费快速增长,人均饮酒量大幅增加。过量饮酒对人体具有一定程度的损害,进入人体的乙醇约有90%~95%在肝脏中代谢,乙醇对人体肝脏损害最为严重,这主要是乙醇及其衍生物在肝脏分解代谢过程中直接或间接诱导炎性介质产生炎症反应、氧化应激反应,进而通过氧化应激促使反应性氧化物增加,诱发肝脏脂肪聚集。

儿茶素作为鞣质的前体,广泛分布于植物中,具有多种药物活性成分,具有降血脂、抗氧化等的作用。(+)-儿茶素( (+)-Cat)是儿茶素的异构体之一,大多数研究集中在(+)-Cat的提取鉴定、提取方法改进以及加工过程中儿茶素的稳定性方面,仅有少量文献研究(+)-Cat在降血脂方面的作用。表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)是绿茶中含量最为丰富、性质最为活泼的儿茶素类物质。扬州大学食品科学与工程学院的胡博然、丁建才等人选择儿茶素单体中的基础构型(+)-Cat和儿茶素类物质中抗氧化活性最强的单体EGCG,探究它们对乙醇诱导的细胞氧化应激及脂代谢紊乱的作用,同时对比它们的差异,以期为儿茶素及儿茶素类物质在功能性食品开发方面提供一定的参考。

1、(+)-Cat、EGCG作用浓度的确定

不同浓度的(+)-Cat和EGCG作用于HepG2细胞24 h后的细胞毒性如图1A所示,200 μmol/L (+)-Cat和EGCG组细胞存活率较对照组显著下降(P<0.05);250、300 μmol/L (+)-Cat和EGCG组细胞存活率较对照组极显著下降(P<0.01),300 μmol/L EGCG已达到细胞的半数致死浓度;其余各组与对照组相比均无显著变化(P>0.05)。

(+)-Cat和EGCG对乙醇诱导HepG2细胞存活率的影响分别如图1B、C所示,不同浓度的(+)-Cat和EGCG能够减弱300 mmol/L乙醇诱导的细胞毒性作用。200、250 μmol/L (+)-Cat组细胞存活率极显著高于300 mmol/L乙醇组(P<0.01);200 μmol/L EGCG组细胞存活率极显著高于300 mmol/L乙醇组(P<0.01)。

综合(+)-Cat、EGCG对细胞的毒性作用以及二者抗乙醇毒性作用的结果,本研究选择200 µmol/L作用浓度的(+)-Cat和EGCG分析(+)-Cat和EGCG对脂代谢紊乱和氧化应激的调节效果并比较二者的差异。

2、(+)-Cat、EGCG对HepG2细胞TG含量的影响

如表2所示,与正常组相比,(+)-Cat组及EGCG组的TG含量无显著差异(P>0.05),ETOH组TG含量显著上升(P<0.05),说明在乙醇的作用下,HepG2细胞脂代谢异常,造成TG的堆积。与ETOH组相比,(+)-Cat+ETOH组、EGCG+ETOH组的TG平均含量显著降低(P<0.05),分别为ETOH组的63%和44%,说明(+)-Cat与EGCG有效缓解了脂质堆积,且EGCG的效果更好。

3、油红O染色观察(+)-Cat与EGCG对HepG2细胞脂滴的影响

由图2可知,ETOH组与正常组、(+)-Cat组和EGCG组相比,可见较多的斑点状红色脂滴,说明乙醇诱导后的HepG2细胞出现脂质积累;(+)-Cat+ETOH组和EGCG+ETOH组与ETOH组相比,脂滴明显减少,说明(+)-Cat和EGCG的干预均可减轻乙醇诱导的HepG2细胞脂质堆积。油红O染色结果与TG含量检测结果较为一致。Wu Qiong等研究发现,EGCG在一定甘油的作用下能抑制细胞内的抑制3-羟基-3-甲基戊二酰基辅酶a还原酶活性,降低HepG2细胞内的总胆固醇。

4、(+)-Cat与EGCG对HepG2细胞脂代谢基因表达水平的影响

由图3可知,与正常组相比,ETOH组SPEBP-1、DGAT2 mRNA的相对表达量显著升高(P<0.01,P<0.05),分别为正常组的1.8 倍和1.4 倍;PPARα与CPT1 mRNA相对表达量显著降低(P<0.05,P<0.01),分别为正常组的30%和20%,说明乙醇影响了HepG2细胞脂代谢基因的正常表达。与ETOH组相比,(+)-Cat+ETOH组SPEBP-1、DGAT2 mRNA的相对表达量显著降低(P<0.05),均约为ETOH组的80%;PPARα与CPT1 mRNA相对表达量显著升高(P<0.05、P<0.01),分别为ETOH组的2.4 倍和3.3 倍;EGCG+ETOH组SPEBP-1、DGAT2 mRNA的相对表达量显著降低(P<0.05)分别为ETOH组的69%和75%;PPARα与CPT1 mRNA相对表达量显著升高(P<0.05)分别为ETOH组的2.1 倍和2.8 倍。说明(+)-Cat和EGCG均能通过调节HepG2细胞脂代谢相关基因的表达,对乙醇诱导HepG2细胞脂代谢紊乱具有恢复作用,在相同浓度条件下EGCG的恢复效果更好。

5、(+)-Cat与EGCG对HepG2细胞抗氧化酶SOD活力和脂质过氧化物MDA浓度的影响

如表3所示,与正常组相比,EGCG组SOD活力显著增加(P<0.05),MDA浓度无显著变化(P>0.05)。ETOH组较正常组的SOD活力显著降低(P<0.05),为正常组的42%;MDA浓度显著增加(P<0.05),为正常组的1.7 倍。研究表明,过量饮酒导致机体发生氧化系统与抗氧化系统失衡,产生大量的活性氧,经过脂质过氧化作用产生MDA,当MDA在机体内上升时SOD清除自由基的能力相对下降。ETOH组SOD活力降低、MDA浓度增加验证了这一结论。(+)-Cat+ETOH组与EGCG+ETOH组较ETOH组的MDA浓度显著降低(P<0.05),分别为ETOH组的37%和23%,SOD活力显著提高(P<0.05),分别为ETOH组的1.2 倍和1.4 倍。综上可知(+)-Cat、EGCG干预后可改善细胞内的氧化应激状态,增强抗氧化酶活性、减弱脂质过氧化,其中EGCG的效果更好。

结论

本实验中ETOH组细胞TG含量明显高于正常组(P<0.05),与乙醇诱导后细胞DGAT2 mRNA的表达量升高有一定关系。(+)-Cat、EGCG干预组TG含量较ETOH组低,说明(+)-Cat、EGCG干预后下调DGAT2 mRNA的表达,对降低TG合成起到了一定作用。本实验中EGCG干预组的SREBP-1 mRNA表达量、TG含量较ETOH组低,与EGCG能够激活腺苷酸蛋白活化激酶有关。(+)-Cat干预组对下调SREBP-1 mRNA的表达,减少TG的合成也有一定作用,但效果没有EGCG干预组明显。本研究中(+)-Cat、EGCG干预组的PPARα和CPT1 mRNA的表达量都较ETOH组高,同时干预组的TG含量较ETOH组低,说明(+)-Cat、EGCG能上调PPARα和CPT1 mRNA的表达,加快脂质氧化。本实验中,对乙醇诱导下HepG2细胞损伤,(+)-Cat、EGCG均能降低TG和脂肪酸合成相关基因SREBP-1、DGAT2的表达,减少TG的合成;增加HepG2细胞中脂肪酸氧化基因PPARα和CPT1的表达,促进细胞脂肪酸氧化,减少脂质积累;提高SOD活性,降低MDA浓度,改善细胞氧化应激状态。EGCG对乙醇诱导下HepG2细胞的保护作用优于(+)-Cat。

本文《(+)-儿茶素与表没食子儿茶素没食子酸酯对乙醇诱导HepG2细胞脂代谢紊乱及氧化应激的影响》来源于《食品科学》2021年42卷13期114-120页,作者:胡博然,丁建才,曹杨,田颖,国凤华,袁静。DOI:10.7506/spkx1002-6630-20201009-051。点击下方阅读原文即可查看文章相关信息。

修改/编辑:袁艺;责任编辑:张睿梅

图片来源于文章原文及摄图网

为进一步促进动物源食品科学的发展,带动产业的技术创新,更好的保障人类身体健康和提高生活品质,北京食品科学研究院和中国食品杂志社在宁波和西宁成功召开前两届“动物源食品科学与人类健康国际研讨会”的基础上,将与郑州轻工业大学、河南农业大学、河南工业大学、河南科技学院、许昌学院于2021年11月27-28日在河南郑州共同举办“2021年动物源食品科学与人类健康国际研讨会”。欢迎相关专家、学者、企业家参加此次国际研讨会。

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