角蛋白6B:角蛋白6B基因位于染色体12q13上,由9个外显子组成,其编码的蛋白质属于II型角蛋白家族,属于高分子量角蛋白。
CD44:是一种跨膜糖蛋白,其基因位于11号染色体,转录后经过选择性剪接形成多种亚型,包括CD44v6。 CD44在多种恶性肿瘤中异常表达,尤其是肿瘤干细胞。
膀胱癌干细胞参与促进膀胱癌术后复发和耐药。许多研究表明,6B角蛋白参与多种不同类型肿瘤的发生和进展,与肿瘤的预后密切相关。
观察CD44+膀胱癌干细胞中角蛋白6B表达的差异及其对膀胱癌干细胞增殖、迁移和自我更新的影响,进一步探讨6B角蛋白在膀胱癌干细胞中表达的影响。膀胱癌患者的预后。
采用免疫磁珠分选法对CD44+5637人膀胱癌干细胞进行分选,RT-PCR检测分选后相关干基因SOX2、OCT4、NANOG的表达,并通过体外肿瘤进一步验证CD44+球体形成实验。这些细胞具有癌症干细胞的自我更新能力。
RT-PCR检测CD44+膀胱癌干细胞中6B角蛋白的表达; CD44+5637膀胱癌干细胞分为2组,其中6B角蛋白沉默会干扰6B角蛋白。将RNA 转染到分选的CD44 + 膀胱癌干细胞中。未转染的CD44+膀胱癌干细胞作为空白对照组。转染2天后,收获细胞并通过平板克隆实验、划痕实验和体外成球实验进行检测。 6B角蛋白沉默后膀胱癌干细胞的增殖、迁移和自我更新能力; 免疫组化染色检测24例膀胱癌患者膀胱肿瘤组织切片中角蛋白6B和CD44v6的表达; 膀胱肿瘤组织与ONCOMINE数据库比较6B角蛋白表达对患者总生存率的影响。
相关来源基因(SOX2、OCT4、NANOG)和角蛋白6B在分类CD44+细胞中的表达高于CD44-细胞(P< 0.05),其细胞增殖,迁移和体外成球能力显著升高(P < 0.05),角蛋白6B小干扰RNA可下调角蛋白6B在CD44+膀胱癌干细胞中的表达(P < 0.05);②与空白对照组相比,角蛋白6B小干扰RNA转染后的CD44+膀胱癌干细胞增殖和迁移能力显著降低(P < 0.05),
肿瘤球的数量明显降低(P < 0.05),而Notch1和Hes1 mRNA表达升高(P < 0.05);③角蛋白6B与CD44v6在患者膀胱癌组织中的表达差异有显著性意义(P=0.006),其中角蛋白6B高表达的膀胱癌患者总生存率低于角蛋白6B低表达的患者;④上述数据证实,角蛋白6B可在CD44+膀胱癌干细胞中可高度表达,并且促进膀胱癌干细胞的增殖、迁移和自我更新,角蛋白6B高表达有助于膀胱癌患者生存情况的改善。
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