猪支原体肺炎的防控（2）——猪群感染情况评价

猪支原体肺炎是影响猪场效益的重要呼吸道疾病，科学防控该病需要及时准确地监测诊断，摸清评估猪群的感染情况。根据临床症状、病理变化，结合流行病学可对该病作出初步诊断，确诊需要实验室检测，此外，屠宰场肺部病变评估也常常用来评估呼吸系统疾病的流行情况调查以及所采取防控措施的有效性。

1 临床症状、病理变化

潜伏期一般11～16天，最短为3～5天，最长可达1个月以上。猪支原体肺炎主要临床表现为连续性干性咳嗽，中后期表现为腹式呼吸，皮肤发白与进行性消瘦等。体温一般正常，如继发其他疾病，患病猪可能会出现发烧，采食量下降，呼吸困难等症状，严重时甚至会造成猪只死亡。

严重

主要病变只见于肺、肺门淋巴结和纵膈淋巴结。感染猪肺炎支原体的猪肺脏尖叶、心叶、副叶呈对称性深红色肉样变或白色的胰样变，触感较坚实。如果与其他细菌或病毒混合感染，则肺部病变区域扩大，同时其他病原引起的病变严重程度也会增加。肺门淋巴结和纵膈淋巴结显著肿大，切面隆起，湿润多汁，呈黄白色，有时边缘轻度充血。

2 实验室检测

2.1 样品采集

病原检测样品可以采集以下样品：（1）支气管肺泡灌洗液。这是PCR检测最佳的样品，但是采集麻烦，需要对猪只进行剖杀。（2）喉拭子。采集时把猪的口打开，将长拭子深入到咽部深部，不停地摩擦黏膜获取样品。（3）肺脏组织，可采集肉变和正常区域的交界处。（4）扁桃体样品。（5）深部鼻咽拭子。（6）口腔液，常常用于群体检测。（7）鼻拭子。

抗体检测样品：（1）血清样本用于血清抗体（IgG）检测；（2）鼻拭子和肺泡灌洗液等样品用于黏膜抗体检测。

2.2 病原分离

分离鉴定患病猪体内的Mhp是诊断猪支原体肺炎的“金标准”。Mhp是最难培养的支原体之一，其原因一是 Mhp 对营养要求高，在无细胞培养基中需要添加 20%的猪血清才能生长; 二是猪鼻支原体是猪体内的常在支原体，生长速率大大快于 Mhp，因此在 Mhp 的分离培养中，常被猪鼻支原体的生长掩盖。目前最常用的 Mhp培养基包括Friis 培养基和江苏Ⅱ号( KM2) 培养基，以及在此基础上的改良培养基。

2.3 PCR或荧光PCR检测

PCR方法具有简便、迅速、特异、灵敏等优点，报道的PCR方法主要针对Mhp的16S rＲNA、P36和P46等基因序列设计引物；还有实验室开发了基于16S rＲNA序列的区分Mhp、猪鼻支原体和絮状支原体的多重PCＲ方法，这对于鉴定猪肺组织中的不同支原体提供了简便的鉴别方法。巢式PCR方法特异性和灵敏性都较普通PCＲ方法高,适合于临床样本中Mhp的检测,其检测下限可达到1个病原体；但该方法易污染，对检测环境控制和操作规范要求较高。荧光PCR快速、敏感，采用闭管操作，减少了产物对环境的污染，并且还可以定量检测，现已经大量用临床样品的检测。

2.4 抗体检测

血清学诊断可以采用微量补体结合试验、微量间接血凝试验和ELISA检测等方法。ELISA是临床应用最广泛的Mhp抗体检测方法，血清IgG抗体的检测常用的有IDEXX公司开发的基于全细胞的Mhp间接ELISA抗体检测试剂盒和Oxoid公司生产的基于单抗的Mhp阻断ELISA抗体检测试剂盒；国内也有这两种ELISA检测方法的研究报道和商品化试剂盒。江苏农科院研制了检测猪肺炎支原体SIgA抗体的间接ELISA试剂盒，并获得了新兽药证书。用该试剂盒对感染猪样品检测，在感染后4-7天就能检测到SIgA抗体，比血清IgG检出时间更早，且能区分灭活疫苗免疫和自然感染产生的SIgA抗体。

3 屠宰检查

在屠宰场对肥猪肺脏病变评估，可用于呼吸系统疾病的流行情况调查以及防控措施效果评价。法具有操作简单易行、执行成本低且可进行连续性监测等优点，但也具有较强的主观性，需对评分人进行统一培训以确保结果的一致性。

该

肺脏肉变评分主要有55分法和28分法两种。55分法即Goodwin评价法，根据不同肺叶所占的比例进行病变程度打分，其中，每个心叶，尖叶最大值为10分，隔叶和副叶最大值为5分，最高55分。评定后将各肺叶评定的得分相加即为肺病变得分(不考虑各肺叶的大小)，分数越高，肺炎症面积越大，损伤越严重，其中5分为轻微，10分为中度，15分为重度，20分为严重。28分法即Madec法，是根据对7个肺叶病变程度按猪支原体肺炎特异性损伤的肺叶面积(其中副叶只观察腹面，其他6个肺叶腹面和背面均需观察)占该肺叶表面积的比例进行评定，每个肺叶最高为4分，其中，无损伤为0，损伤面积占肺叶面积的1%-25%为1分，26%-50%为2分，51%-75%为3分，大于75 %为4分。各得分用如下公式进行计算总得分:(各肺叶背面观察得分之和+各肺叶腹面观察得分之和）/2+副叶观察得分。（未完待续）

文章来源：李金海华 派生物俱乐部