随着生活水平的不断提高,全球对酒精的消费日益增加。然而,过量或长期饮酒会影响中枢神经系统、肝脏、心脏及胃肠等全身多处重要组织器官的正常结构和功能,其中胃黏膜损伤便是饮酒导致的最直接的组织损伤,研究和开发天然资源中具备养胃、护胃功效的营养成分,对于降低饮酒导致的胃部相关疾病的发病率具有重要意义。
谷子脱下来的皮壳称谷糠,《黄帝内经》认为谷糠“功同米而优于米,补而不滞,温而不燥”,对于脾胃具有诸多益处。现代研究发现,以全谷物为主要原料的面食或发酵醋中掺入谷糠后,具有明显的健胃功效,表明谷糠中可能含有健胃、护胃的功能成分,但目前对其具体发挥作用的成分、机制尚不清楚。
山西大学生物医学研究院的剌晓琴、生命科学学院李汉卿*和生物技术研究所的李卓玉*等通过连续3 周对Wistar大鼠灌胃BPIS进行干预,采用BPIS干预结束后灌胃75%(体积分数,下同)乙醇溶液(剂量为10 mL/kg mb)构建急性胃黏膜损伤模型,分析BPIS对胃黏膜损伤的预防作用,从组织形态及组织病理学水平分析胃黏膜损伤情况;同时采用1 000 mmol/L酒精处理人胃黏膜上皮细胞(GES-1)12 h的方式构建酒精性GES-1细胞损伤模型,从细胞活力及形态方面观察BPIS对GES-1细胞的保护作用。最后以大鼠胃黏膜组织和GES-1细胞中超氧化物歧化酶(SOD)活力、丙二醛(MDA)、凋亡相关蛋白(Cleaved Caspase 3、Cleaved Caspase 8、Cleaved Caspase 9蛋白)相对表达水平及GES-1细胞中ROS水平为指标,分析BPIS保护胃黏膜的分子机制。本实验以谷糠多酚为试材,为改善酒精性胃黏膜损伤的研究提供参考,同时为开发具有养胃、护胃特性的功能食品提供理论依据。
1、BPIS对饲养过程中Wistar大鼠体质量及摄食量的影响
随着饲养时间的延长,各组别大鼠体质量逐渐增加,但组间无显著差异(P>0.05)(图1A);在各组别中,平均每只大鼠每日摄食量虽有所变化,但其数值上不存在统计学差异(P>0.05)(图1B)。
2、BPIS对酒精诱导的大鼠胃黏膜损伤的影响
干预结束后,对照组大鼠的胃黏膜组织颜色淡红,表面光滑有弹性,褶皱完整且走向规则(图2A);与对照组相比,模型组大鼠的胃黏膜出血严重,部分皱襞减少甚至消失(图2B);与模型组相比,BPIS干预组黏膜皱襞完整,出血性损伤明显较少(图2C)。参照Guth标准对胃黏膜损伤指数进行测定,结果显示:对照组、模型组、BPIS干预组的胃黏膜损伤指数平均值分别为0、104.8、30.9(图2D)。以上结果表明,BPIS明显改善了酒精诱导的大鼠胃黏膜损伤。
3、BPIS对酒精诱导的大鼠胃黏膜损伤的组织病理学分析结果
Wistar大鼠胃部组织HE染色结果显示:对照组大鼠胃黏膜上皮结构完整,腺体排列整齐,黏膜层、黏膜下层和肌肉层结构完整、层次清晰,未见明显水肿及炎症细胞浸润(图3A)。模型组大鼠胃黏膜组织正常结构消失,上皮细胞排列无序且大量死亡,有明显的炎症细胞浸润,黏膜下层水肿,但损伤未累及黏膜肌层(图3B)。与模型组相比,BPIS干预组的大鼠胃黏膜组织结构完整,腺体细胞排列较为整齐,偶见细胞脱落,但黏膜下层没有明显的水肿,与正常的胃组织结构较为接近(图3C)。随后利用Mascuda评分标准对各组胃黏膜损伤指数进行评价,结果显示:对照组,模型组,BPIS干预组的胃黏膜损伤指数平均值分别为0、8.8、2.0(图3D)。以上结果进一步表明提前摄入BPIS对酒精引起的胃黏膜损伤有明显的预防作用。
4、BPIS对酒精诱导的GES-1细胞活性的影响
如图4A所示,当1 000 mmol/L酒精作用12 h时,GES-1细胞存活率低于50%,故选用此条件作为细胞造模条件;随后利用不同质量浓度的BPIS分别孵育GES-1细胞24、48、72 h,发现BPIS在72 h内对细胞没有明显的毒副作用(图4B)。进一步选择1、5、10、15 μg/mL BPIS预处理细胞24 h后,1 000 mmol/L酒精继续作用12 h,观察BPIS对GES-1细胞活力的影响,结果表明,BPIS能够明显改善酒精引起的GES-1细胞存活率降低的现象且呈剂量依赖性(图4C)。因此,选择15 μg/mL BPIS孵育GES-1细胞24 h作为后续BPIS干预组的处理条件。
进一步对GES-1细胞进行形态学观察发现,对照组细胞状态良好,呈上皮细胞样,结构边缘清晰,贴壁牢固(图5A);模型组细胞形态明显变小变圆,部分细胞呈现漂浮状态(图5B);BPIS干预组细胞形态结构完整,趋于上皮细胞样,基本完全贴壁(图5C)。说明BPIS对酒精诱导的GES-1细胞有明显的保护作用。
5、BPIS对酒精诱导的大鼠胃黏膜组织和GES-1细胞氧化应激的影响
如图6所示,GES-1细胞经酒精处理后,细胞内ROS水平极显著升高(P<0.01),约为对照组的1.7 倍;与模型组相比,经BPIS预处理的细胞ROS水平极显著降低(P<0.01),表明BPIS能够明显缓解酒精引起的细胞氧化损伤程度。
如图7A、B所示,与对照组相比,灌胃酒精后的模型组大鼠胃黏膜组织中MDA含量极显著增加(P<0.01),SOD活力极显著降低(P<0.01);而与模型组相比,BPIS干预组大鼠胃黏膜中MDA含量极显著降低(P<0.01),SOD活力极显著增加(P<0.01)。如图7C、D所示,与对照组相比,GES-1细胞经酒精处理后,MDA含量极显著升高(P<0.01),SOD活力极显著下降(P<0.01);与模型组相比,经BPIS处理的GES-1细胞氧化应激水平有所改善,MDA含量极显著降低(P<0.01),SOD活力极显著升高(P<0.01)。
6、BPIS对酒精诱导的大鼠胃黏膜组织和GES-1细胞中调亡相关蛋白的影响
如图8所示,与对照组相比,模型组大鼠胃黏膜组织和GES-1细胞中Cleaved Caspase 3、Cleaved Caspase 8、Cleaved Caspase 9蛋白相对表达水平明显上调;与模型组相比,BPIS处理可以明显抑制Caspase 3、Caspase 8、Caspase 9蛋白的活化。
结论
综上,谷糠多酚具有明显改善酒精性胃黏膜损伤的作用,其潜在的作用机制是通过提高胃黏膜的抗氧化能力(包括提高SOD活力,降低MDA和ROS水平),增加胃黏膜上皮细胞的活性,抑制其凋亡,从而达到保护胃黏膜的作用。胃肠健康是衡量个体健康的主要指标,本研究关于BPIS对酒精性胃黏膜损伤的保护作用机制还停留在较为基础的研究阶段,以后还需在现有基础上继续深入挖掘,以期为BPIS在保护胃肠健康、缓解酒精性胃黏膜损伤功能食品的开发应用中提供更多的理论依据。
本文《谷糠多酚对酒精性胃黏膜损伤的保护作用》来源于《食品科学》2022年43卷13期64-71页,作者:剌晓琴,刘一志,张立超,李汉卿,李卓玉。DOI:10.7506/spkx1002-6630-20210719-221。点击下方阅读原文即可查看文章相关信息。
修改/编辑:袁艺;责任编辑:张睿梅
图片来源于文章原文及摄图网。
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