血栓形成过程中伴有血管的炎症性损伤,内皮细胞、血小板以及白细胞之间的相互作用是血管壁发生炎症性损伤的病理基础。血管内皮细胞的结构及功能障碍、血小板的过度活化是血栓形成的重要因素。当血管内皮的完整性遭到破坏时内皮下胶原被暴露,激活血小板,从而启动血栓的形成。因此,保护血管内皮细胞和抑制血小板的过度活化对血栓性疾病的治疗及预后具有重要意义。
作为食药用菌,榆干离褶伞具有抗氧化、保肝、抗栓等功效。榆干离褶伞溶栓酶(LUFE)是榆干离褶伞菌丝体中分离纯化的一种溶栓酶,具有抗栓、保护血管内皮细胞等作用。研究表明LUFE抑制血栓形成过程中血小板的过度活化。延边大学附属医院的崔日花与延边大学医学院的沈明花*等通过大鼠动脉血栓模型研究LUFE在血栓形成过程中对血管内膜炎性损伤的保护作用;同时在体外观察胶原诱导的血小板活化过程中LUFE对血小板黏附功能的影响及其对相关信号通路的调控作用,进一步明确其抗栓及抗炎机制。
LUFE对动脉血栓大鼠血管组织形态学的影响
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如图1所示,假手术组颈动脉内膜光滑完整,血管内皮细胞排列连续,无血管内皮细胞剥脱,管腔内未见血栓形成和炎症细胞浸润。模型组血管内膜氧化损伤,内膜上未见血管内皮细胞,管腔内可见较多的炎症细胞和混合血栓的形成。与模型组相比,阿司匹林组和LUFE高剂量组血管内膜的损伤程度减轻,血栓形成比较稀疏,血小板聚集程度明显减少,偶见少量的炎性细胞。
LUFE对动脉血栓大鼠血清IL-8、IL-6和CRP质量浓度的影响
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如表1所示,模型组大鼠的IL-8、IL-6和CRP质量浓度显著或极显著高于假手术组(P<0.05、P<0.01),提示FeCl3作用于血管壁后引起局部组织的炎症反应。与模型组相比,阿司匹林组IL-8、CRP质量浓度极显著下降(P<0.01),而LUFE高剂量组IL-8、IL-6和CRP质量浓度显著或极显著下降(P<0.05、P<0.01),说明阿司匹林和高剂量的LUFE可以抑制炎症因子的产生或释放。
LUFE对动脉血栓大鼠血清MCP-1、ICAM-1和PECAM-1质量浓度的影响
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如表2所示,模型组大鼠MCP-1、PECAM-1质量浓度极显著高于假手术组(P<0.01)。与模型组相比,经阿司匹林或LUFE干预的大鼠MCP-1、ICAM-1和PECAM-1质量浓度极显著下降(P<0.01),提示阿司匹林和LUFE能一定程度地减弱炎症细胞的趋化和细胞间的黏附反应。
LUFE对动脉血栓大鼠PLA水平的影响
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如图2所示,与假手术组相比,模型组大鼠PLA水平显著升高(P<0.05),提示血栓性形成过程中伴有炎症。与模型组相比,LUFE高剂量大鼠的PLA水平显著降低(P<0.05),提示LUFE具有抑制血栓形成过程中的炎症反应。
LUFE对血小板在固化胶原上黏附的影响
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如图3所示,空白对照组中见到少量的血小板黏附在BSA表面,其黏附面积为(0.77±0.44)%,说明血小板在BSA表面黏附很少。正常对照组血小板在胶原上的黏附面积为(16.97±2.52)%,与空白对照组相比极显著增多(P<0.01)。LUFE低、中、高剂量组血小板在胶原上的黏附面积分别为(13.79±1.08)%、(9.22±1.77)%、(7.08±1.56)%,与正常对照组相比显著或极显著降低(P<0.05、P<0.01),提示LUFE能抑制血小板在胶原上的黏附。
LUFE对血小板Ca2+水平的影响
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如图4所示,胶原组荧光强度为54.26±4.24,与正常对照组(19.76±1.63)相比,荧光强度极显著升高(P<0.01);LUFE低、高剂量组血小板荧光强度分别为52.11±2.34和37.45±3.54,与胶原组相比明显降低。结果说明LUFE能够抑制胶原引起的血小板内Ca2+水平的升高。
LUFE对血小板LAT、PLCγ蛋白磷酸化水平的影响
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如图5所示,与正常对照组比较,胶原组血小板LAT、PLCγ的磷酸化水平极显著升高(P<0.01);与胶原组相比,LUFE低剂量组血小板PLCγ磷酸化水平显著下降(P<0.05),中、高剂量组血小板LAT、PLCγ磷酸化水平显著或极显著降低(P<0.05、P<0.01),提示LUFE不同程度抑制胶原诱导的LAT、PLCγ的活化。
结论
综上所述,LUFE抑制血栓形成过程中血管内膜的损伤,其机制可能与LUFE的抗炎作用以及抗血小板活化有关。
本文《榆干离褶伞溶栓酶对动脉血栓大鼠血管内膜的保护作用》来源于《食品科学》2022年43卷15期134-140页,作者:崔日花,李钰,苏新,卫莹,陈佳芮,沈明花。DOI:10.7506/spkx1002-6630-20210818-242。点击下方阅读原文即可查看文章相关信息。
修改/编辑:袁艺;责任编辑:张睿梅
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