王玉成团队建立了基于CRISPR-Cas9的反向染色质免疫共沉淀技术

CRISPR-Cas9系统具有编辑的精度高、简便、高效等优点，是重要的基因编辑技术。将CRISPR-Cas9系统中的Cas9的D10A 和H841A定点突变后，称为dead Cas9 (dCas9)。该蛋白失去了切割DNA的核酸酶活性，但其仍可以在gRNA的引导下与目的DNA序列结合。因此，CRISPR-dCas9系统可以特异地识别并结合在目标DNA位点，但不切割该位点，具有广泛的用途。

近日，东北林业大学王玉成教授团队在Plant Physiology在线发表了题为 “A Reverse Chromatin Immunoprecipitation technique based on the CRISPR dCas9 system” 的研究论文，利用dCas9这种性质，建立了名为Reverse Chromatin Immunoprecipitation technique based on the CRISPR dCas9 system (R-ChIP-dCas9)技术，用于目标染色质DNA结合蛋白的分离。

图1 R-ChIP-dCas9原理
对于DNA结合蛋白的验证，首先构建该蛋白与Flag融合基因的植物表达载体，再瞬时转化到植物中，利用Flag抗体进行ChIP，然后用ChIP-qPCR验证该蛋白是否特异结合目的DNA序列，并用EMSA进一步验证。
R-ChIP-dCas9技术不依赖于是否有稳定的遗传转化系统，凡是能被农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)转化的植物理论上都可以应用，能快速、准确地分离出目的DNA所结合的蛋白，尤其对基因的上游调控蛋白鉴定具有重要意义，应用前景广阔。
东北林业大学林木遗传育种国家重点实验室的博士研究生王智博贺子航作为该论文的并列第一作者，王玉成教授作为通讯作者。研究团队的高彩球、王超教授和研究生刘竹君、曲铭也参与了相关工作。本研究获得了国家自然科学基金（No. 31971684）和黑龙江省头雁创新团队（林木遗传育种创新团队）的资助。

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Forestry Research是一本专注于林学领域的期刊，一本全新的国际化的、开放获取的、具有严格的编辑筛选和评估流程的期刊。主要发表与森林科学和多个相关领域的研究论文、方法、综述和观点；涵盖范围从分子到种群，再到生态系统。期刊主编由美国密歇根理工大学林业资源与环境学院卫海荣教授担任。

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