乙肝寡核苷酸创新思路，Aligos早期经验，ASO/siRNA/STOP优化路径

临床阶段生物制药公司（Aligos Therapeutics）是全球研发新机制乙肝创新药制药公司之一。Aligos管线中正有多种新靶点，如衣壳抑制剂、siRNA处在1或2期临床开发中，PD-L1和新型CAM处在临床前研究。

全球生物制药公司基于寡核苷酸研发的乙肝创新药，HBV触发位置图，来自Aligos

乙肝寡核苷酸创新思路，Aligos早期经验，ASO/siRNA/STOP优化路径

开发乙肝创新药，源自慢性乙型肝炎是一个未得到满足的巨大医疗需求。当前核苷（酸）类似物（NAs）可降低HBVDNA的水平，但因NA自身机理，需要长期甚至终身用药，很少产生功能性治愈（即有限时间疗法，在有限时间内实现HBVDNA检测不到，HBsAg丢失）。

反义寡核苷酸（ASO）与小干扰RNA（siRNA）的作用机理十分近似，正被科研人员应用于乙肝药物开发中。基于HBV复制生命周期更多步骤和宿主免疫反应，Aligos公司曾经研发过ALG-020572（一种ASO分子，已终止）和ALG-125755（一种siRNA，正在1期）。

HBV基因组有一个重叠的阅读框：信使RNA编码的多个产物，可以使用单一寡核苷酸结构沉默。临床药物开发中，研究人员已观察到由加拿大杨梅生物制药公司（Arbutus）和Alnylam公司研发先进的X区靶向siRNA构建物的ALT升高。

GalNAc, scpBNA-5-Me-C和5-OH-C单体大规模合成完全启用

ASO ALG-020572虽然已终止，但其发现及技术经验有助推动后来者研究乙肝反义寡核酸。该乙肝创新药是运用Aligos公司的生物信息学平台选择和优化新型ASO结构，具有最大化覆盖率和最小化脱靶潜力。

值得注意的是，Aligos公司科研人员使用Luxna生物技术的专有化学物质优化序列，以提高其体外药效、稳定性及潜在安全性。Luxna XNA是第三代核苷酸，可能提高核酸酶抗性和降低肝毒性；有效的ASOs，被偶联到Aligos公司专有的GalNAc配体上，用于靶向肝输送。通过上述这种方法，Aligos公司最终选择了ASO候选药物 ALG-020572，这既是ALG-020572的发现过程。

Luxna下一代XNA化学ASO

相较于早期应用LNA技术开发的药物，ALG-020572的潜在优势包括，改进的碱基特异性杂交、更高的抗核酸酶-增强稳定性、水化模式的调节和减少肝毒性。

GLP毒理学研究中，研究人员在对ALG-020572耐受最高剂量测试中，没有发现安全信号。进入临床开发后，在健康受试者的单次上升剂量1a期研究中，480毫克皮下注射，被认为是测试中安全的最高剂量。

Luxna个体修饰对亲本序列的体内外药效影响

在慢性乙肝受试者（CHB）的多次上升剂量1b期研究中，起始剂量为皮下注射210毫克，计划注射7次；有明确证据表明目标参与，抗病毒效果，但给药4-29天后耐受性差，多名受试者经历了ALT >10X ULN′′关于药物性肝损伤（DILI）。在1b期对安全性观察后，ASO ALG-020572被终止。

Aligos制药公司，目前已有两款寡核苷酸乙肝新药终止，它们的终止经验为科研人员提供更多优化路径。例如，ALG-010133（STOPS），其体外活性比REP-2139高100倍，以细胞为基础的检测（转染）——尚未建立合适的体内药效模型。在GLP研究中，该化合物具有良好的安全性和耐受性，在进入临床开发时，该化合物也同样在健康受试者和CHB中证明具有上述特点，但在测试最高剂量（400 mg SC, QW, 12周）前，未见抗病毒反应。

前面提及的ASO, ALG-020572，在体外和体内临床前试验中均证明有效，在GLP研究和健康受试者中，证明具有良好的安全性和耐受性。有明确证据的目标参与和抗病毒效果，但在慢乙肝受试者的多次给药后，耐受性差。因此，对于开发乙肝病毒寡核苷酸类药物，全球尚需具有更高安全系数的反义寡核苷酸（ASO）和具有有效性（STOPs）的模型。

Aligos公司推进siRNA的筛选漏斗

ALG-125755是一种已进入1期临床试验的siRNA。同时，ALG-125755在多个细胞系中，可以有效抑制HBsAg释放：在HepG2.2.15细胞和HBV感染的原代人肝细胞中，Aligos测定了ALG-125903(未结合ALG-125755)对HBsAg释放的抑制作用——在测试的最高浓度时，未观察到细胞毒性。

在HepG2.2.15和HBV感染的PHH细胞中，ALG-125903具有抑制HBsAg释放的皮摩尔EC50值。应用经验教训PXB小鼠模型的进一步研究：S靶向siRNA与X靶向siRNA相比，ALT没有明显升高；截至第39天的中期数据，支持ALG-125755的持续发展。

ALG-125903 (ALG-125755的非共轭形式)基因型覆盖和脱靶分析

小番健康结语：总结前人失败经验，可以少走弯路，提高药物开发成功率。以Aligos制药公司早期开发的一款ALG-010133为例，它是一种S-抗原转运抑制寡核苷酸聚合物 (STOPS™)，在第1期研究中，受试者的乙肝表面抗原水平未见到有意义的下降而终止，前面也提到，如果想要继续开发这条路径，尚需要建立合适的体内药效模型才能够优化这种专门针对表面抗原的化合物发展。

ALG-020572，是一种反义寡核苷酸，与ALG-010133不同的是，它是因安全性原因停止，提高该路线安全系数是后续开发方向之一。目前，Aligos制药公司只有两个新机制乙肝候选药物正在临床试验中，包括siRNA ALG-125755（1期，已于2022年10月15日开始在健康受试者中给药）和II类衣壳组装调节剂（CAM）ALG-000184。

根据Aligos制药公司对ALG-000184对1b期数据描述，这是到目前为止全球该同类靶点研究药物中数据最理想的。Aligos制药公司另有两款新机制包括PD-L1和CAM-I化合物，都正在临床前的推进候选药物提名阶段。Aligos制药公司的药物开发目标是，开发一种联合疗法来实现功能性治愈慢性乙肝。