《Nature》史上引用次数最多的十篇论文

引用的次数，是衡量一篇科研论文影响力水平的最常用数据。为了纪念科学引文索引SCI诞生五十周年，《Nature》官方网站上公布了一份统计数据（Van Noorden R, Maher B, Nuzzo R. The top 100 papers. Nature, 2014, 514(7524): 550-3. ），统计了目前所有科研论文的引用次数数据。

有三篇论文的引用次数超过了100000，遥遥领先。这三篇涵盖的领域属 于 生物技术--该领域也占了被引用最多文章的大部分名额，前十名里有七篇 。其中 WB实验就独占4篇，分别排名第1、2、3和6。 1951年发表的Lowry蛋白定量法遥遥领先，而Bradford蛋白定量法位列第三。排在它们之间的是用于蛋白 电泳 的Laemmli缓冲液 。排第六是 WB实验的开山之作（详见WB--诞生历史）， 发明 了 应用最广的蛋白印迹 的 方法，也最为贴近目前实验室用的蛋白印迹技术 。

下面是引用前十大Nature论文：

1. protein measurement with the folin phenol reagent(1951)， 利用福林酚试剂测量蛋白质含量（1951），引用次数：305,148；

2. Cleavage of structural proteins during the assembly of head of the dacteriophage T4(1970)，噬菌体T4头部组装过程中结构蛋白裂解（1970），引用次数：213,005；

3. A rapid and sensitive method for the quantitation of microgram quantities of protein utilizing the principle of protein-dye binding(1976)，蛋白染料结合法快速灵敏测量微克级蛋白（1976），引用次数：155,530；

4. DNA sequencing with chain-terminating inhibitors(1977)，链终止抑制法DNA测序（1977），引用次数：65,335；

5. Singl-step method of RNA isolation by acid guanidinium thiocyanate-phenol-chloroform extraction(1987)，酸性硫氰酸胍-苯酚-氯仿萃取一步提取RNA法（1987），引用次数：60,397；

6. Electrophoretic transfer of proteins from polyacrylamide gels to nitrocellulose sheets: procedure and some applications(1979)，蛋白质从聚丙烯酰胺凝胶到硝化纤维素膜的电泳转移：步骤与应用（1979），引用次数：53,349；

7. Deveiopment of the colle-Salvetti correlation-energy formula into a functional of the electron density(1988)，将柯勒-萨尔维蒂相关能量方程转化为电子密度的函数（1988），引用次数：46,702；

8. Density-functional thermochemistry. lll. The role of exact exchange(1993)，密度函数的热化学lll.正解交换的作用（1993），引用次数：46,145；

9. A simple method for the isolation and purification of total lipides from animal tissues(1957)，从动物组织中分离、纯化总脂肪的简单方法（1957），引用次数：45,131；

10. CLUSTAL W:improving the sensitivity of progressive multiple sequence alignment therough sequence weighting,position-sequence alignment through sequence weighting,position-specific gap penalties and weight matrix choice(1994)，CLUSTAL W：通过序列加权、位点特异性空位罚分和加权矩阵选择来提高渐进多序列比的敏感度（1994），引用次数：40,289。

题外：

蛋白质浓度测定最准确的方法应该是“双缩脲法”，此方法测定只与蛋白质肽键有关，不会因为蛋白质所含氨基酸残基不同而出现差异。缺点是灵敏度偏低，目前已被Bradford法和BCA法所代替，但是Bradford法受到蛋白质所含碱性或芳香族氨基酸残基不同出现差异；BCA法虽然70%与蛋白质肽键有关，但是依然受到蛋白质中半胱氨酸，胱氨酸，酪氨酸和色氨酸含量不同的影响。如果能提高双缩脲法的灵敏度，此方法将重新焕发活力。

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来源：龙师兄实验室，编辑：nhyilin

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