如何精准进行挑战性液体的移液操作？反向移液法的科学方法

以高准确度和精度重复进行挥发性、粘性、起泡和油性液体的移液是相当具有挑战性的。这些液体的固有特性可能导致它们粘附于塑料或滴漏。采用反向移液法可以有效应对这些挑战，因为此方法专为处理这类难以操作的液体设计。通过充分考虑液体的具体特性，结合反向移液法，可以显著提高移液过程的准确性和效率

一、应该选择哪种移液器？

为了获得尽可能准确和可重复的结果，建议选择与移液量最接近的移液器标称容量（最大容量）。图1展示了使用赛多利斯Picus 50-1,000μL 和 5 - 120μL 移液器进行的两组100μL乙 醇移液实验。使用Picus 5 - 120μL 移液器，当操作者、移液模式和移液技术保持一致时，移液模式选择反向移液技术可以显著提高移液的准确度和再现性。在进行反向移液操作时，预润洗循环的次数也应保持一致，以确保每次移液的效果都尽可能相同，从而优化结果的准确性和可重复性。

在反向移液中，吸液量超过目标体积。将柱塞压到第一个停止位置后，排出总目标体积，多余的量会留在吸头中。多余的量可返回吸头中继续使用，也可通过将柱塞压到第二个停止位置来废弃吸头中的多余液体。在某些情况下，存在余量对移液性能有明显好处，例如移液挥发性或粘性液体时。这些移液技术之间的差异如图2所示。

电动移液器提供额外移液技术，有助于减少移液的差异和时间。其中包括多次分液、多次吸液、稀释和滴定等。

二、应该用哪种移液技术？

在正向移液和反向移液这两种模式中，良好的操作实践包括在吸入液体时保持移液器直立（0°角），以及在向目标容器排液时将移液器稍微倾斜（30-45°角）。这些标准操作步骤有助于提高移液的准确性和效率。

图3A显示了当使用正向移液法吸取1,000μL水时，吸液角度对准确度的影响。数据显示，随着吸液角度的增加，实际移液量几乎呈直线增加。图3B则揭示了在使用反向移液技术进行排液时，将移液器保持在0°角而非45°角可能对准确度和精度产生的负面影响。在进行反向移液法操作时，将移液器保持在45°角可以获得更精确的结果。这一发现强调了在执行反向移液法时，适当的角度调整对于保证移液准确性和精度的重要性。

三、如何应对液体从移液器吸头滴落？

如果液体从移液器吸头滴落，应首先确保吸头正确密封在移液器的吸头圆锥上。图4显示了使用不同制造商的移液器吸头时的移液性能差异。

如果在转移挥发性液体以外的其他液体时有大量泄漏的情况，请检查移液器吸头圆锥是否干净；使用无纺布和合适的清洁剂（如乙 醇）将其擦拭干净。检查吸头圆锥或活塞和套筒之间的密封件有无损坏。

挥发性液体

移取挥发性液体和溶剂（如乙 醇、丙酮或乙腈）时，从移液器吸头滴落是常见现象。为避免滴落，请预润洗吸头，反向移液更有助于改善滴漏情况。

图5A显示了在处理乙腈时，无预润洗的正向移液和适当预润洗的反向移液之间的差异。同样的建议适用于任何容量，如图5B所示。

粘性液体

缓慢的吸液和排液速度至关重要，因此实现粘性液体的可靠移液其实只需适当的技术和耐心。反向移液可提高准确度。还需注意的是，请勿将吸头浸入液体太深。此外，吸液时，移液器吸头应在液体中多浸几秒钟，因为这样将使液体足以全部吸入到吸头中。排液时，建议将吸头抵住目标容器壁，使液体附着在目标容器上。宽口吸头也可用于促进液体流动，尤其是在溶液中有颗粒的情况下。

图6显示了采用反向移液和Optifit 宽口吸头移取1,000μL甘油与采用正向移液和标准Optifit 吸头移取1,000μL 甘油的差异。

Picus Nxt 移液器在用户认为有帮助的情况下，可通过正向移液进行重复吹出。

油类

与正向移液相比，反向移液油的排液更准确，再现性更好。在图7中，使用赛多利斯Tacta 10-100μL 手动移液器移取丁香酚。

泡沫液体

含清洁剂或蛋白质的液体容易起泡。处理这些液体时，必须缓慢移液并使用反向移液技术。

四、移液器应多久维护一次？

经常清洁移液器是一种良好操作。每天擦拭外部和吸头圆锥可减少交叉污染机率，并确保正确吸头密封。清洁移液器下端内部可去除积聚的灰尘，这有助于活塞密封并保持较低的操作力。清洁还有助于发现移液器是否因溶剂或蒸汽而老化，以免影响结果。

请记住，无论何时拆装下端，最好在分析天平上检查移液器性能，确认组装正确，无任何东西阻碍活塞的完全密封。

建议移液器的最长维护间隔时间为一年。但应根据移液频率、已移液的液体以及移液器的使用年限和型号等因素来调整间隔时间。校准应至少每年进行一次，或根据使用频率每3 - 6 个月进行一次。更换移液器零件（如吸头圆锥或活塞）后，还应进行校准；现场高压灭菌后，只需进行性能检查。

总结

移液技术在实验中获得理想移液结果的过程中扮演着核心角色。尤其在处理具挑战性的液体时，掌握反向移液法显得尤为重要。在使用反向移液法时，良好的实践包括始终首先考虑液体的特性，并据此采取适当的移液操作。这种方法通过考虑液体的物理和化学属性来优化移液过程，提高实验结果的准确性和重复性。

表1总结了各种液体的建议移液技术。