作者 | 赵蓉
单位 | 广州医科大学附属市八医院检验科
前 言
阿米巴肠病是由阿米巴寄生在结肠内,引起的阿米巴痢疾或阿米巴肠炎。寄生于人体肠道内的阿米巴有6种:溶组织内阿米巴、迪斯帕内阿米巴、结肠内阿米巴、哈门内阿米巴、微小内蜒阿米巴和布氏嗜碘阿米巴。
除了溶组织内阿米巴被认为有致病力外,其余均为肠腔共栖型原虫,不具致病性。它们一般不侵入人体组织且不引起临床症状,但在大量原虫寄生、宿主免疫力下降或合并细菌感染而致肠功能紊乱时,可出现非特异性的症状。鉴别致病性溶组织内阿米巴和非致病性阿米巴,临床上具有重要的诊断意义。
随着人们生活水平的不断提升,卫生意识逐渐增强,许多寄生虫已不常见,实际工作中几乎很少遇见,导致目前很多检验人对许多寄生虫形态的认知只停留在教科书层面,当在工作中实际遇到时,难以鉴别,易出现漏诊和误诊。现将临床大便常规检测中发现的一例迪斯帕内阿米巴病例报道如下。
案例经过
患者,男,29岁,因“肝功能检查结果异常”来我院就诊。患者因患者平素有生冷饮食习惯,医生开具大便常规和寄生虫孵化等检测。
该患者粪便外观颜色为黄褐色,质软,未见粘液,无异常。常规上粪便全自动分析仪进行检测,仪器报警显示蓝氏贾第鞭毛虫和阿米巴感染(见图1A),工作人员立刻提高警惕,查看报警图片(见图1B、C),排除仪器将白细胞误判为寄生虫虫卵,但不排除吞噬细胞、人芽囊原虫等可能,立刻生理盐水涂片镜检。
备注:A、B、C图均为粪便全自动分析仪上报警信息
图1粪便仪报警提示
生理盐水涂片镜检后发现粪便中存在大量类似包囊物体,圆形,包囊内可见有1~4个细胞核。为了进一步看清该包囊,工作人员立刻进行了碘染色和瑞氏染色(本实验室无铁苏木素)。碘染色可见1~4个细胞核。瑞氏染色后包囊内内容物不清晰,但可见明显的拟染体,包囊外一圈荚膜。(见图2)
图2 不同涂片下阿米巴包囊
因工作人员在实际工作中从未见过阿米巴,立刻求助科室内寄生虫前辈,但科室内前辈们也不敢确定;工作人员立刻求助某医学交流平台的全国各位老师,在群里热心老师们的指导下,确认是阿米巴,但无法判断是溶组织内/迪斯帕内/哈氏内阿米巴。
在老师们的指导下,生理盐水湿片加盖玻片轻压,吸干多余水分后油镜下观察,包囊大小约10~20um大小,可排除哈氏内阿米巴(见图3)。因致病性溶组织内阿米巴与非致病性迪斯帕内阿米巴包囊形态完全相同,致病性溶组织内阿米巴感染早期排便、大便性状都可正常,无法完全区分,只能通过其它方法进行检测。
图3 100×(油镜)下阿米巴包囊
工作人员立刻致电患者,询问患者情况。患者近期无腹痛腹泻,排便正常,无里急后重感,大便性状正常。告知患者感染了阿米巴,但不明确是否致病,需要PCR分型检测。征得患者同意后,送患者粪便去某大学医学部进行PCR分型检测。
结果回来后显示为迪斯帕内阿米巴。
案例分析
迪斯帕内阿米巴(Entamoeba dispa , E . d )是与溶组织内阿米巴(Entamoeba histolytica , E . h )形态相同,生活史相似的另一虫种。全世界约有5亿人感染阿米巴,其中很大一部分为迪斯帕内阿米巴。
目前诊断及鉴别阿米巴的方法有镜检法、酶联免疫(ELISA)法、免疫荧光(IFA)法、间接血凝试验和PCR等方法[1, 2]。但通过镜检在粪便中检出阿米巴包囊及滋养体仍是实验室用来检测阿米巴感染的主要手段。
镜检阿米巴有生理盐水涂片、碘染色涂片、铁苏木素染色和三色染色涂片。其中生理盐水涂片操作简单、成本低,但检出率低,与白细胞、吞噬细胞、人芽囊原虫等不易鉴别;碘染涂片镜检法是临床最为普遍使用。
致病性溶组织内阿米巴与非致病性迪斯帕内阿米巴包囊形态完全相同,呈圆形,10~20um大小;有1~4个细胞核,核周染粒大小均匀、排列整齐,核仁细小位于核的中心或稍偏位;其内可有棒状拟染体和糖原泡;4核包囊为成熟包囊。
碘染色涂片呈黄棕色,囊壁薄而透明,核膜和核仁清晰可见。铁苏木素染色涂片呈灰蓝色或淡灰蓝色,囊壁不明显,核呈蓝黑色,棒状拟染体呈明显的蓝黑色。三色染色涂片呈绿色或灰绿色,囊壁不明显,核呈暗紫色或蓝黑色,拟染体呈明显的暗紫色。
E . h小滋养体与E . d滋养体形态完全相同,仅查出小滋养体,应报告为E . h/E . d感染。即使镜检发现存在包含有吞噬红细胞的滋养体,可高度考虑为溶组织内阿米巴,但极少部分的迪斯帕内阿米巴也可吞噬红细胞。
迪斯帕内阿米巴均为无症状型,但10%溶组织内阿米巴感染也为无症状的带包囊者。即使患者有症状,也不能立即得出肠阿米巴病的诊断,应根据流行病学史、血清学检测或PCR检测证实感染虫柱确属[3]。
本例患者,镜下未见滋养体,仅见包囊,包囊大小约15~20um,可排除哈氏内阿米巴(包囊大小约4~12um),虽然患者无消化道系统症状,但初步报告只能报告为E . h/E . d感染,最后需通过PCR法鉴别确诊为迪斯帕内阿米巴。
总 结
镜检检查阿米巴包囊及滋养体是其确诊的重要手段。尽管从形态学上可以通过包囊的大小和滋养体的形状将部分内阿米巴虫种进行区分,但在实际中仅根据形态进行内阿米巴虫种鉴定难度很大。因而在实际工作中,对于临床高度怀疑肠阿米巴病的患者,应多次、及时、清洁、保温送检标本,对于生理盐水涂片疑似阿米巴包囊及滋养体者,可借助碘液及苏木素等染色手段观察其自身的形态特点,但最后的确诊仍需通过血清学或分子学方法进行鉴别。
参考文献
[1] Kamidani S, Melgar M, Robinson C, et al. No Detection of Entamoeba Histolytica by Multiplex Polymerase Chain Reaction in Children With Acute Non-bloody Diarrhea in Guatemala[J]. Pediatr Infect Dis J. 2018, 37(4): e107-e108.
[2]吴亮亮,黄伟,温绍云.腹泻患者溶组织内阿米巴感染现状调查[J].基层医学论坛. 2023, 27(22): 106-108.
[3] Lopez-Lopez P, Martinez-Lopez M C, Boldo-Leon X M, et al. Detection and differentiation of Entamoeba histolytica and Entamoeba dispar in clinical samples through PCR-denaturing gradient gel electrophoresis[J]. Braz J Med Biol Res. 2017, 50(4): e5997.
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编辑:徐少卿 审校:陈雪礼
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