单体也能Gut (IF23)！丹酚酸抑制YTHDF1阻断麦谷蛋白诱导的炎症途径

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本期推荐的是由西班牙巴斯克大学研究团队近期发表在英文期刊Gut(IF=23）的一篇文章，丹酚酸通过抑制YTHDF1阻断麦谷蛋白诱导的炎症途径。

【期刊简介】

【题目及作者信息】

Inhibition of YTHDF1 by salvianolic acid overcomes gluten-induced intestinal inflammation

乳糜泻（Coeliac disease, CD）是一种慢性炎症性自身免疫性疾病，主要影响小肠，通常发生在遗传上有易感性的个体摄入麸质后。目前唯一有效的治疗方式是终身严格遵循无麸质饮食。然而，饮食依从性的困难可能导致并发症，这突显了对辅助治疗方法的迫切需求。

最近在《Gut》杂志上，描述了在CD患者中激活的一种新的m6A-XPO1-NFκB信号通路。特别是，发现YTHDF1 m6A阅读器能够选择性地结合XPO1 mRNA的5'非翻译区（UTR），并促进其翻译，增加XPO1介导的炎症，这在体外和体内的肠细胞中都有体现。

这些发现为针对m6A机制蛋白的新治疗方法打开了大门，这些方法已经用于其他疾病的治疗。有趣的是，新研究已经将丹酚酸（Salvianolic acid, SAC）描述为YTHDF1的选择性抑制剂，能够挽救与脆性X综合征相关的神经前体细胞缺陷。

总之，这里我们展示了两种不同的选择性YTHDF1抑制剂，它们能够减少肠道细胞中由麦谷蛋白引起的炎症，而在体内没有明显的副作用。尽管仍然需要进一步探索其他传统的CD途径，但这项研究为开发针对CD等肠道炎症性疾病的有希望的治疗策略铺平了道路。

【结果】YTHDF1抑制剂减少麦谷蛋白诱导的肠道炎症。

体外HCT-116肠道细胞系实验：未经处理组（NT），用胃蛋白酶-胰蛋白酶消化的麦谷蛋白（pepsin-trypsin digested gliadin, PTG）处理组、两种不同的YTHDF1抑制剂（PTG+Y20和PTG+Y22）处理组。

(A) 通过WB使用GAPDH作为内参来定量XPO1和p50蛋白水平。(B) 通过RT-qPCR和ELISA分别定量IL8 RNA和蛋白水平。

A-B说明 ：用YTHDF1抑制剂处理HCT-116肠道细胞后，麦谷蛋白（PTG）诱导的炎症有所下降，表现为XPO1、NFκB和IL8在RNA和蛋白水平上的增强都有减少。

体内C57BL/6小鼠实验：在3周内，每周一次，C57BL/6小鼠在无麸质饮食中通过灌胃给予霍乱毒素（引起腹泻）作为对照组CT，PTG/YTHDF1抑制剂（PTG+Y20和PTG+Y22）作为实验组。

(C) 通过RT-qPCR使用Rplp0作为内源性对照定量Xpo1 RNA水平。(D) WB实验定量p50蛋白水平。(E) 通过RT-qPCR使用Rplp0作为内源性对照定量IL8小鼠同源物Mip2a RNA水平。

C-E说明： 用PTG+两种丹酚酸处理组的小鼠表现出比仅暴露于PTG的小鼠更低水平的Xpo1、NFκB和Mip2a、Cxcl5和Cxcl1细胞因子（人类IL8的同源物）。

(F) 小肠上皮形态计量和组织学量化对PTG的肠道反应也进行了评估，CT（A）和PTG处理小鼠（B）的小肠切片的H&E染色。（G) 绒毛高度与隐窝深度比率，以评估麸质和YTHDF1抑制剂对小肠上皮形态学的影响，以及对疾病过程的组织学定量。(H) Ifng和CD45 RNA水平通过RT-qPCR使用Rplp0作为内源性对照定量。

F-H说明：PTG处理显示绒毛高度与隐窝深度比率显著降低（图1 F和G），而在Y20处理的小鼠组中与PTG处理的小鼠相比，可以观察到轻微的恢复，表明这种抑制剂可能有助于在炎症期间保护肠道免受破坏（图1G）。与麸质接触性皮炎相关的Th1反应细胞因子Ifng（图1H）和Il21（补充图B），以及CD45+上皮内淋巴细胞特异性基因表达也在PTG处理的小鼠中增加，但在丹酚酸（SAC）抑制剂处理的小鼠中减少，表明在SAC治疗后，麦谷蛋白特征性的免疫细胞浸润减少。

临床样本：患有CD的患者的肠活检在诊断时与YTHDF1抑制剂Y20和Y22一起孵育24小时。(I) 通过WB测XPO1和p50蛋白水平。(J) 通过RT-qPCR测IL8 RNA水平。

I-J说明 ：CD患者的肠道活检体外模型中，当与抑制剂孵育时，观察到XPO1、NFκB和IL8的减少（图1I，J）。

总结：所有这些体外、体内和临床的结果表明，基于SAC的选择性YTHDF1抑制剂可以帮助改善由麦谷蛋白引起的肠道炎症。

【补充图】YTHDF1抑制剂在体内减轻炎症且无毒性。

在控制和处理的小鼠之间，它们的体型和体重没有显著变化。此外，在处理的小鼠组中，饮食或粪便重量方面也没有发现胃肠道效应（补充图C-E）。

除了淋巴细胞标记（图1H，补充图B），我们还证实了我们的体内PTG刺激通过增加上皮细胞中的杯状细胞数量以及固有层中的嗜酸性粒细胞计数激活了炎症反应（补充图F）。 在用PTG和任一种YTHDF1抑制剂处理的小鼠中，这些计数恢复到控制值，再次指向这些SAC分子至少可以部分保护免受肠道炎症。

有趣的是，在另一个肠道炎症情况下（在IFNG刺激下），两种抑制剂也显示出减少炎症性IL8趋化因子水平的能力（补充图1G），表明这些小分子在其他不依赖麸质的肠道炎症情况下也可能是有用的。

A) 通过RT-qPCR定量测量了IL8的小鼠同源物Cxcl5和Cxcl1的RNA水平，使用Rplp0作为内源性对照。B) 同样方法定量了Il21的RNA水平。C) 测量了麦胶插管（PTG通过口服插管的方式给予实验动物）对小鼠食物消耗的影响。D) 测量了小鼠体重变化。E) 测量了小鼠粪便重量的变化。F) 汇总了免疫细胞在固有层的浸润、上皮组织中杯状细胞的数量以及嗜酸性粒细胞在固有层的计数，这些数据来自CT、PTG、PTG+Y20和PTG+Y22小鼠的小肠切片的苏木精-伊红染色。G) HCT-116肠细胞经不同处理后，IL8 RNA和ELISA蛋白水平的定量测量结果。

本文作者介绍了两种丹酚酸（Y20和Y22）选择性抑制YTHDF1，这两种抑制剂能够在不产生明显体内副作用的前提下，有效减轻由麦胶引发的肠细胞炎症。尽管对于克罗恩病（CD）的其他传统治疗途径还需要更深入的研究，但本研究为治疗肠道炎症性疾病提供了一个充满希望的新方向。

本文涉及到体外细胞实验、小鼠体内实验以及患者临床数据，虽然实验设计简明、数据量有限，但这种结合了临床视角的研究备受瞩目。临床数据之所以珍贵，是因为这些研究为我们深入洞察疾病机理提供了窗口，激发了开发创新诊断工具和治疗方案的灵感。更进一步，这些研究成果具有转化的潜力，能够直接触及临床实践，从而提升患者的治疗效果和生活质感。

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