网易首页 > 网易号 > 正文 申请入驻

机械负荷下调核糖体蛋白L35 通过Hedgehog-Gli1促进软骨细胞衰老

0
分享至

骨关节炎(OA)的特征是关节软骨退行性改变和受累关节软骨基质丢失,导致慢性疼痛、运动受限,最终降低生活质量。关节软骨主要由软骨细胞和细胞外基质(ECM)组成,其退变降解的过程主要由一系列软骨基质降解酶所介导。细胞衰老是与 ECM 降解和软骨细胞功能障碍密切相关的另一个因素。在病理状态下,软骨细胞可能会去分化,失去其功能表型,并趋向衰老。在培养过程中,软骨细胞衰老和去分化伴随着软骨细胞特异性蛋白(如II型胶原和糖蛋白)表达的降低。

软骨细胞维持软骨组织形态,对机械刺激是非常敏感的。生理范围内的机械负荷对于维持软骨细胞稳态是必要的。然而,由肥胖、关节不稳定、劳损或创伤引起的异常负荷可导致软骨退变,并且是与骨关节炎发展相关的重要危险因素。

核糖体蛋白在机体的生长发育以及细胞稳态的调节中起着关键作用。既往研究表明,lncNB1通过结合核糖体蛋白L35(RPL35)诱导神经母细胞瘤细胞的增殖和存活,而高水平的RPL35与肿瘤预后相关。众所周知,RPL35 作为核糖体 60s 的小亚基在蛋白质合成中起着至关重要的作用,如 RPL35 通过 RPL35/ERK/HIF1α 轴上调 HIF1α 促进有氧糖酵解。

基于此,广东省骨与关节退行性疾病重点实验室的科研团队在最近的一项研究中详细阐述了机械应力与细胞衰老之间的关系,并确定了 RPL35 蛋白表达的降低在过度机械应力促进的软骨细胞衰老中起着关键介质的作用。该研究表明,外源性添加 RPL35 可以减轻应力负荷诱导的 Hedgehog(Hh)通路的激活。这揭示了关节内注射 RPL35 可作为 OA 治疗方法的潜力。研究成果发表在Journal of Orthopaedic Translation期刊题为“RPL35 downregulated by mechanical overloading promotes chondrocyte senescence and osteoarthritis development via Hedgehog-Gli1 signaling”。

过度机械负荷被认为是研究骨关节炎生理特征的良好模型,为了鉴定机械负荷后对软骨细胞的重要基因,施加 5%、10% 或20% 的 0.5 Hz 循环拉伸应力24小时,并进行 RNA 测序分析。差异表达分析揭示了459个差异表达的基因。与正常软骨细胞相比,过度机械负荷(20%)处理的软骨细胞中 RPL35 基因表达表现出最明显的下调。进一步验证 RPL35 与过度机械负荷处理的软骨细胞之间的关联,发现过度机械应力不仅促进了分解代谢效应,而且刺激了软骨细胞衰老。

已知促炎细胞因子,如 IL-1β 和 TNF-β,在 OA 的发病机制中起作用。因此,使用重组 IL-1β 刺激的原代小鼠软骨细胞建立了 OA 模型,WB结果显示,与正常软骨细胞相比,IL-1β 刺激的软骨细胞中 RPL35 降低。这些数据表明,过度机械负荷诱导体外衰老软骨细胞中 RPL35 下调。

为了评估体外研究结果是否可以在体内应用,构建机械性超负荷引起的 OA,将右膝关节给予60次 4、9 和 13.5 N 的轴向压缩负荷,在人 OA 中检测了 RPL35 蛋白水平。IHC染色结果显示,与轻度损伤的外侧胫骨平台软骨样本相比,接受全膝关节置换术的 OA 患者胫骨平台内侧 RPL35 蛋白水平降低(图1 A、B)。当使用膝关节承受 0.5 N 的静态轴向压缩负荷10 分钟的 OA 小鼠模型时观察到相同的结果,即与正常软骨相比,RPL35 蛋白水平在 OA 小鼠中呈现进行性下调,并伴有软骨损伤增加(图1 C-E)。进一步分析机械负荷对关节软骨衰老的影响,在 13.5 N 的机械压缩作用2-4周后,发现小鼠关节软骨细胞中 MMP13-、P16- 和 P21- 阳性软骨细胞的数量增加,Col2- 阳性软骨细胞的数量显著减少。这表明,机械超负荷加速了关节软骨中的软骨细胞衰老。

番红O染色显示,在 13.5 N 的峰值压缩负荷下持续多次刺激 2 或 4 周可诱导小鼠膝关节蛋白多糖的丢失。然而,在 4 N 和 9 N 的刺激下,软骨细胞没有显著变化(图1 F、G)。IHC 软骨染色同样证实,在施加 13.5 N 的过大机械压缩后,软骨细胞 RPL35 蛋白水平显著下降(图1 F-K)。这些发现揭示了 RPL35 蛋白水平随着 OA 的进展而降低,表明 OA 严重程度与 RPL35 表达之间存在关联。

接下来,通过敲低 RPL35 以探索其在 OA 进展中的作用,评估了 RPL35 的缺失是否驱动原代小鼠软骨细胞的退变。结果显示,RPL35 敲低降低了 Col2 水平,增加了 MMP13、P16 和 P21 的水平。此外,还通过关节注射研究了 RPL35 在体内的作用,观察到体内敲低 RPL35 后软骨细胞中 RPL35 的表达显著降低,且这种降低伴随着软骨的退行性变化。在关节软骨承受过大机械应力的小鼠中也观察到了类似现象,但并未观察到其敲低加剧了骨关节炎的进展。

然后,通过过表达 RPL35 以探索其对软骨细胞稳态的影响,构建 RPL35 过表达(Ad-RPL35)和阴性对照(Ad-NC)载体。在关节内注射 Ad-RPL35 的机械负荷小鼠中,与接受机械负荷和 Ad-NC 处理的小鼠相比,OA 的严重程度显著降低,且未观察到软骨损伤。有趣的是,IHC结果显示,RPL35 表达的变化与上述分析的关节软骨损伤程度的变化趋势一致(图2 A)。此外,与对照组相比,机械负荷处理4-6周的小鼠中,MMP13-、P16- 和 P21- 阳性软骨细胞的数量增加,而 Col2- 阳性软骨细胞的数量显著减少。RPL35 的添加缓解了退行性病变(图2 B)。此外,过度的机械负荷刺激促进了这些衰老因子的表达,而 RPL35 的添加在体外逆转了这些效应(图2 C、D),表明其对软骨细胞衰老的保护作用。

最后,研究人员试图确定哪种信号通路负责 RPL35 敲低后诱导软骨细胞衰老。因此,鉴定了 4989 个转录本,发现上调的转录本大部分在 Hedgehog(Hh)通路中富集。qPCR结果显示,敲低 RPL35 或过度机械负荷导致软骨细胞 GLI-1 和SMO表达增加,它们是 Hh 通路激活的标志物。IHC 和 IF 均表明,在过度机械负荷下软骨中 SMO、Gli-1 和 PTCH1 Hh 信号增加,而添加 RPL35 恢复了 SMO、Gli-1 和 PTCH1 的表达。这些结果说明了 RPL35 对 Hh 通路的抑制作用。

此外,还确定了 Hh 的激活是否有助于 RPL35 缺失诱导的软骨细胞衰老,发现在原代小鼠软骨细胞中,Hh 通路抑制剂环巴胺(Cyclopamine)部分降低了 RPL35 缺失诱导的 P21、P16 和 MMP13 的蛋白表达水平。上述结果表明,Hh通路激活升高至少在一定程度上导致了 RPL35 缺失引起的关节软骨退化。

通路分析显示,与正常软骨细胞相比,用 RPL35 siRNA 处理的原代软骨细胞中,有17个上调的转录本介导 Hh 信号通路,其中酪蛋白激酶1ε(CK1ε)是最突出的(图3 A、B)。qPCR和WB分析显示,软骨细胞中 RPL35 的敲低提高了内源性 CK1ε 水平(图3 C)。此外,在过度机械负荷处理的软骨细胞中也观察到 CK1ε 水平升高,而添加 RPL35 恢复了 CK1ε 的表达(图3 D)。IF染色分析也观察到相同的趋势(图3 E)。

因此,探讨了 CK1ε 在 OA 发展中的作用。与正常软骨细胞相比,CK1ε 过表达的软骨细胞 MMP13 水平升高、Col2 水平降低以及衰老相关标志物 P16 和 P21 水平升高,而敲低 CK1ε 则具有保护作用(图3 F)。此外,还探索了 siRPL35 是否通过靶向 CK1ε/SMO 信号来调控 OA 过程,WB结果表明,RPL35 敲低的影响被 CK1ε 敲低显著减弱(图3 G)。此外,RPL35 敲低后 CK1ε 水平升高,并与 SMO 共定位增加(图3 H),进一步提示了 CK1ε 激活 SMO 的可能性。总之,这些数据表明,抑制 RPL35 可导致 OA,可能是通过提高 CK1ε 蛋白水平,从而与 SMO接触激活,最终激活 Hh 通路。

综上所述,该研究明确了 RPL35 和 CK1ε 在 OA 中的作用和联系,实验结果验证了 CK1ε 在关节软骨中的过表达激活了 Hh 通路,表明 RPL35 的缺失和 CK1ε-Hh 信号通路的激活在生物力学诱导的软骨细胞衰老和退变中起着关键作用。因此,靶向关节内补充 RPL35 是减缓 OA 发展的一种方式。

参考文献:Zhu J, Liu L, Lin R, Guo X, Yin J, Xie H, Lu Y, Zhang Z, Zhang H, Yao Z, Zhang H, Wang X, Zeng C, Cai D. RPL35 downregulated by mechanical overloading promotes chondrocyte senescence and osteoarthritis development via Hedgehog-Gli1 signaling. J Orthop Translat. 2024 Apr 1;45:226-235. doi: 10.1016/j.jot.2024.01.003. PMID: 38596341; PMCID: PMC11001632.

原文链接:https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/38596341/或点击阅读原文图片来源:所有图片均来源于参考文献

图片来源:所有图片均来源于参考文献

本文旨在分享、交流生物领域研究进展,进入官网naturethink官网或关注“Naturethink”公众号,了解更多相关内容。

点击了解:仿生压力细胞培养仪

特别声明:以上内容(如有图片或视频亦包括在内)为自媒体平台“网易号”用户上传并发布,本平台仅提供信息存储服务。

Notice: The content above (including the pictures and videos if any) is uploaded and posted by a user of NetEase Hao, which is a social media platform and only provides information storage services.

/阅读下一篇/

机械力通过靶向Smad同源物1诱导巨噬细胞外泌体促进干细胞成骨

返回网易首页 下载网易新闻客户端
相关推荐
热点推荐
加州为什么是无证移民的“天堂”?

加州为什么是无证移民的“天堂”?

海格讲
2025-06-11 06:25:05
空袭只是开始?乌克兰突然意识到:泽连斯基的秘密藏不住了

空袭只是开始?乌克兰突然意识到:泽连斯基的秘密藏不住了

文雅笔墨
2025-06-11 12:44:28
波切蒂诺:我才是罪魁祸首,如果你们想批评我,那就来吧

波切蒂诺:我才是罪魁祸首,如果你们想批评我,那就来吧

懂球帝
2025-06-11 13:09:54
为啥说不能随意介入别人的因果?网友:能懂,都付出了巨大代价了

为啥说不能随意介入别人的因果?网友:能懂,都付出了巨大代价了

解读热点事件
2025-06-10 00:15:03
京都一碗拉面3万日元,中国游客吐槽遭遇拉面刺客,后悔“没看清就下单了”

京都一碗拉面3万日元,中国游客吐槽遭遇拉面刺客,后悔“没看清就下单了”

日本物语
2025-06-10 21:09:45
网传耳环妹高考顺利,前座考生却很崩溃:她坐在后面影响我心态

网传耳环妹高考顺利,前座考生却很崩溃:她坐在后面影响我心态

妍妍教育日记
2025-06-10 20:39:49
胡静朱兆祥带儿子回国,与戚薇李承铉夫妇聚餐,两家人成知己好友

胡静朱兆祥带儿子回国,与戚薇李承铉夫妇聚餐,两家人成知己好友

清游说娱
2025-06-11 10:07:47
张伟出院后回乡,他身后黑衣美女意外火了

张伟出院后回乡,他身后黑衣美女意外火了

观察鉴娱
2025-06-11 09:26:56
《拳皇94》全人物战败画面,不知火舞身体都被打爆了

《拳皇94》全人物战败画面,不知火舞身体都被打爆了

街机时代
2025-06-10 15:00:02
台媒炒作“大陆安排部分媒体高层闭门会议”,国台办:无中生有、恶意造谣

台媒炒作“大陆安排部分媒体高层闭门会议”,国台办:无中生有、恶意造谣

环球网资讯
2025-06-11 11:10:58
1夜4笔重磅转会!利物浦破英超纪录 曼城第4签 德布劳内下家诞生

1夜4笔重磅转会!利物浦破英超纪录 曼城第4签 德布劳内下家诞生

阿超他的体育圈
2025-06-11 05:39:25
梅德维德夫全家福引热议,3亿奖金助其定居海外!

梅德维德夫全家福引热议,3亿奖金助其定居海外!

不乖巧的猫
2025-06-11 10:12:11
杨瀚森试训球队被曝光!媒体人:猜猜为啥人家要求咱们千万要保密

杨瀚森试训球队被曝光!媒体人:猜猜为啥人家要求咱们千万要保密

直播吧
2025-06-11 13:29:11
爆冷!温网冠军0-2惨遭淘汰,郑钦文双喜临门,比赛时间曝光

爆冷!温网冠军0-2惨遭淘汰,郑钦文双喜临门,比赛时间曝光

体育就你秀
2025-06-11 08:14:18
广东一股长出轨女下属,车上对话曝光,女方颜值出众美得冒泡

广东一股长出轨女下属,车上对话曝光,女方颜值出众美得冒泡

辣媒专栏记录
2025-06-10 10:45:03
一眼回到20年前!老外吐槽macOS 26液态玻璃神似Windows Vista

一眼回到20年前!老外吐槽macOS 26液态玻璃神似Windows Vista

快科技
2025-06-10 17:20:14
加沙援助物资分发变成“死亡陷阱”,英国、加拿大等五国宣布制裁以色列2位高官 ,美国不爽了,鲁比奥:谴责!

加沙援助物资分发变成“死亡陷阱”,英国、加拿大等五国宣布制裁以色列2位高官 ,美国不爽了,鲁比奥:谴责!

每日经济新闻
2025-06-11 10:29:41
70年代的汉字二次简化,虽然失败,但很多人的姓氏由此改变

70年代的汉字二次简化,虽然失败,但很多人的姓氏由此改变

阿器谈史
2025-06-11 01:30:32
井柏然领证最新续,刘雯终于更新动态,肚子凸起,笑起来很幸福

井柏然领证最新续,刘雯终于更新动态,肚子凸起,笑起来很幸福

手工制作阿歼
2025-06-11 02:44:45
洛杉矶市中心的名场面

洛杉矶市中心的名场面

西楼饮月
2025-06-11 11:57:21
2025-06-11 13:59:00
Naturethink
Naturethink
Naturethink致力于体外仿生培养仪器的研发与应用
249文章数 1关注度
往期回顾 全部

科技要闻

比亚迪凌晨宣布!助力中小企业健康发展

头条要闻

中国双航母同时在太平洋航行 日本通报被指"一惊一乍"

体育要闻

一位中国老板,复兴了欧洲百年俱乐部

娱乐要闻

唐嫣卷入热巴换角风波 杨幂也被牵连?

财经要闻

Labubu神话下的杂音

汽车要闻

5万级5座纯电微型车 奇瑞QQ多米正式上市

态度原创

家居
数码
本地
艺术
公开课

家居要闻

木质灰调 现代轻奢质感

数码要闻

技嘉京东品牌日 RTX 50系显卡&电竞显示器总有一款适合你

本地新闻

非遗里的河南 | 黄河泥变身千年墨宝,写字都带仙气儿~

艺术要闻

故宫珍藏的墨迹《十七帖》,比拓本更精良,这才是地道的魏晋写法

公开课

李玫瑾:为什么性格比能力更重要?