斑马鱼行为篇（105）：斑马鱼胚胎在化妆品评价中应用

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斑马鱼胚胎个体小、繁殖快且单次产卵数量大，能在短时间内获得大量样本，可快速对多种化妆品原料进行初步筛选，提高研发效率，降低成本。斑马鱼与人类基因相似度高达87%，其基因表达和蛋白质功能与人类具有相似性，所以对斑马鱼胚胎有功效或安全性影响的原料，极有可能对人类也产生类似作用，可据此筛选出潜在的有效和安全的化妆品原料。例如二苯酮类紫外线吸收剂(BPs)因稳定性好和结构简单，成本较低，最早广泛用作紫外线吸收剂，可作为化妆品防晒剂使用，以保护皮肤不受紫外线损伤。

成年野生型AB斑马鱼品系，雌、雄独立养殖于水族箱中，水温28.5±0.3 ℃，盐度450 μS~500 μS，pH为7.0~7.5，光照8:00~22:00(10 h)。在收集胚胎前一晚将雌雄斑马鱼放入同一个产卵缸中，中间用透明隔板隔开，第二天一小时光照后抽走隔板交配产卵，收集胚胎，冲洗、挑选，更换Holt buffer溶液，放入培养箱(28.5 ℃)中培养。

急性毒性评价

通过将化妆品原料或成品以不同浓度作用于斑马鱼胚胎，观察胚胎的死亡、发育畸形等情况，确定其半数致死浓度（LC₅₀）等急性毒性指标，快速评估化妆品的急性毒性风险。

斑马鱼胚胎发育迅速且透明，可在显微镜下实时观察化妆品物质对胚胎发育过程的影响，如细胞分裂、器官形成等，检测其是否会导致胚胎发育延迟、畸形等发育毒性问题。

随机选取24 hpf(hour post fertilization，hpf)发育状态一致的野生型斑马鱼胚胎于96孔板中，每孔加入200 μL供试品和1枚胚胎，放入培养箱中，胚胎继续发育，分别在48 hpf、72 hpf和96 hpf时观察胚胎发育情况，计算LD50值。

刺激性评价

随机选取24 hpf(hour post fertilization，hpf)发育状态一致 的野生型斑马鱼胚胎于96孔板中，每孔加入200 μL供试品和 5枚胚胎，给药后分别在0 min、30 min和60 min记录30 s内斑马鱼胚胎的自选旋运动次数。

采用斑马鱼胚胎尾鳍切口中性粒细胞测试方法，化妆品作用于斑马鱼胚胎尾鳍切口后，观察切口处中性粒细胞的聚集情况，以此判断化妆品的温和性和刺激性，若中性粒细胞聚集少，则说明该化妆品刺激性小。

BP-2、BP-3、BP-4、4-MBP对96 hpf斑马鱼胚胎的刺激性

对于一些涉及神经发育或功能研究的实验，可以观察斑马鱼胚胎或幼鱼的行为学变化，如游泳速度、运动轨迹、趋光性等。通过专门的行为学检测设备和软件，记录和分析斑马鱼的行为数据，以评估实验处理对其行为的影响。

参考文献：

• 柳亚锋,李媛,张靖雯,等.基于斑马鱼胚胎模型对二苯甲酮类紫外线吸收剂的安全性研究[J].广东化工,2024,51(22):76-79.

• Z．Klimova，J．Hojerova，M．Berankova，Skin absorption and human exposure estimation of three widely discussed UV filters in sunscreens-In vitro study mimicking real-life consumer habits[J]，Food Chem Toxicol，2015，83：237-250．

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