知识分享|多色探针熔解曲线法在 HLA 分型检测领域的应用

HLA（人类白细胞抗原，Human Leukocyte Antigen）由6号染色体上一类编码 MHC（主要组织相容性复合体，Major Histocompatibility Complex）基因生成。

HLA-I类分子表达在几乎所有细胞表面，有A、B、C三个基因座位，编码产物分别为HLA-A、HLA-B、HLA-C分子的α链；

HLA-II类包括DR、DQ、DP三个区域，每个区域又包含若干个A和B基因，分别编码HLA II类分子（HLA-DR、HLA-DQ、HLA-DP）的α链和β链；

HLA-III类抗原为补体。

图1.HLA分子分类

HLA分型的应用及检测方法

HLA分型在移植医学、疾病诊断测、细胞免疫治疗等领域有着广泛应用。其检测方法主要有血清学分型法、细胞学分型法和DNA分型法等几种方法。

血清学和细胞学分型技术主要侧重于分析HLA抗原的特异性，DNA分型法则侧重于分析基因本身的多态性，随着分子生物学技术的不断发展，DNA分型已成为HLA分型的主要方法。

目前检测HLA基因的方法主要有 HLA-SBT 和 PCR-SSP 技术，但前者需要配套昂贵的基因测序仪试验周期长，不适用于对单一HLA 基因型的检测及临床的普及应用；后者虽然实现了对单一 HLA 基因型的特异检测，但操作繁琐，通量低，容易导致交叉污染，同样不适于临床大规模检测。

MMCA在HLA分型中的应用

多色探针熔解曲线法（MMCA）是一种简便、快速、灵敏度高且特异性强的HLA分型检测方法。其原理是基于多色探针熔解曲线技术，通过检测基因的熔解温度来识别特定的HLA等位基因。

这种方法不需要复杂的仪器设备，操作简便且能够提供高精度的分型结果。

此外，MMCA法还具有较高的灵敏度，能够检测到微量的基因样本，在临床应用中具有很大的优势‌。

HLA-SBT测序法和MMCA法比较

厦门大学李庆阁实验室实验利用MMCA技术对1147人份血液DNA样本进行分型检测，按双盲对照试验，分别应用HLA 序列分型(HLA-SBT) 测序法和 MMCA 法检测各标本的 HLA-B* 58:01基因，比较两种检测方法的符合率。结果如下：

MMCA 法
根据熔解曲线的形状和Tm值，检测1147份人类基因组DNA样本，结果如下：

在HEX 内控峰正常且在阳性特征峰的 Tm 参考值区间内：

1) ROX通道出现正常熔解峰且在阳性特征峰的Tm参考值区间内(图2-A) ，为HLA-B* 58:01 阳性，共检出213例；

2) ROX通道无熔解峰(图2-B) ，故为HLA-B* 58:01 阴性，共检出 917 例；

3) ROX通道虽出现正常熔解峰，但为非阳性特征峰(图2-C) (Tm值不在阳性特征峰的参考区间内) ，判为 HLA-B* 58:01 阴性，共检出 17 例。

HLA-SBT测序法

采用HLA-SBT 测序法进行分型，并将两种方法分型结果进行比较。

表1. MMCA 法和 HLA-SBT 测序法的检测结果比较

由此可以看出，采用 HLA-SBT 测序法与 MMCA法在 1147 人份献血者样本中检出 HLA-B* 58:01 阳性及阴性样本数量相同，分别为 213 和 934 例，符合率为 100%(1147/1147)。

在别嘌呤醇不良反应相关的HLA-B*58:01基因检测中，MMCA法与测序法的符合率达到100%，证明了其在临床应用中的可靠性和准确性。

此外，MMCA法还应用于HLA-B*15:02基因检测，帮助指导临床用药，减少药物不良反应的风险‌。

结论

综上所述，MMCA法作为一种先进的HLA分型检测方法，以其高准确性、高灵敏度和简便的操作流程，在临床检验和遗传学研究中发挥着重要作用。

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