浙江
来源：丁香实验
说到 WB 制胶，相信很多同志都有说不尽的翻车故事。
俗话说的好，工欲善其事必先利其器，SDS PAGE 凝胶就是我们做 WB 要利的器，因为高质量的胶是跑出漂亮条带的重要前提之一。
今天我们就来探讨一下制胶这个事。
一、SDS PAGE 凝胶制备
1、玻璃板梳子的清洁 先用自来水浸泡 5 分钟，洗洁精清洗，注意厚玻璃板两侧沟槽容易残留胶，可以用尖锐的东西轻刮，然后用自来水冲洗干净泡沫，再用纯水冲洗即可，37 度烘干或者吹风筒吹干，注意别用热风长时间近距离吹，厚玻璃板两侧的边条是用粘胶粘在一起的，高热会使粘胶融化，久而久之可能引起密闭性不良甚至边条脱落。
2、制胶试剂准备超纯水，30% 丙烯酰胺，pH8.8Tris-HCl，pH6.8Tris-HCl，10%SDS，10% 过硫酸铵（APS），TEMED，还有 95% 酒精（压胶用）。
注意试剂的有效期，是否澄清透明，若有沉淀或晶体析出，请更换。30% 丙烯酰胺注意避光 4 度保存。pH8.8Tris-HCl 和 pH6.8Tris-HCl 容易出现沉淀，另外注意这两个试剂有两个浓度的，分别是 1.0M 和 1.5M，根据你的配方表来买。10%SDS 低温（4 度以下）时容易结晶析出。
APS 化学性质活泼，常温下暴露于空气下容易变质失效，一般建议配好后分装冻于-20 度冰箱。TEMED 气味恶臭，挥发性强，具有神经毒性，使用时屏住呼吸，在通风的环境下使用，注意密闭避光保存于 4 度。
3、制备分离胶
按照配方表依次加入相应体积的试剂（1.0 mm 玻璃板一块胶总体积 5.0 ml，1.5 mm 玻璃板一块胶总体积 7.5 ml 足矣），加完 SDS 后加 APS 前可以先混匀，然后迅速加入 APS 和 TEMED, 马上混匀（手摇或者振荡器摇匀），灌胶，注意胶的高度，要留有足够的空间给压缩胶，一般压缩胶的深度要求是梳子下缘再往下 1 厘米左右。然后用 95% 酒精压胶，注意加酒精时要缓缓注入，并且要边加边移动枪嘴，以免酒精在同一位置冲出一个凹陷。室温静置 25 分钟。
4、制备压缩胶及插梳子
先判断下层胶是否已经凝固，然后倒掉酒精，再用吸水纸吸干残余酒精，注意纸不能戳到胶面。然后按步骤 3 操作，混匀上层胶试剂后迅速灌胶，可以直接倒，但要注意别倒多了导致其他玻璃板不够，然后迅速插梳子，一次性操作，不可拔出再插。室温静置 20 分钟。
5、凝胶的暂存
根据剩余在离心管中的上层胶是否已经凝固来判断玻璃板中的。
我们长期为科研用户提供前沿资讯、实验方法、选品推荐等服务，并且组建了 70 多个不同领域的专业交流群，覆盖PCR、细胞实验、蛋白研究、神经科学、肿瘤免疫、基因编辑、外泌体、类器官等领域，定期分享实验干货、文献解读等活动。
添加实验菌企微，回复【】中的序号，即可领取对应的资料包哦～
【2401】论文写作干货资料（100 页）
【2402】国内重点实验室分子生物学实验方法汇总（60 页）
【2403】2024 最新最全影响因子（20000+ 期刊目录）
【2404】免疫学信号通路手册
【2405】PCR 实验 protocol 汇总
【2406】免疫荧光实验 protocol 合集
【2407】细胞培养手册
【2408】蛋白纯化实验手册
【2501】染色体分析方法汇总
【2502】国自然中标标书模板
【2503】WB 实验详解及常见问题解答
【2504】DeepSeek 论文写作常用口令
【2505】中国科学院期刊分区表（2025 年最新版）
特别声明：以上内容(如有图片或视频亦包括在内)为自媒体平台“网易号”用户上传并发布，本平台仅提供信息存储服务。
Notice: The content above (including the pictures and videos if any) is uploaded and posted by a user of NetEase Hao, which is a social media platform and only provides information storage services.
